Page 27 - НАУЧНЫЕ ОТКРЫТИЯ: МЕЖДИСЦИПЛИНАРНЫЕ АСПЕКТЫ

Международная научно-практическая конференция

вращения мешалки 220 об/мин). Выживаемость дрожжевых культур

оценивали с использованием методов окрашивания клеток

метиленовым синим и способности к колониеобразованию [4, c. 1068].

Дрожжевые культуры центрифугировали, суспендировали с

использованием фосфатного буфера, добавляли к 200 мкл аликвоты

100 мкл метиленового синего (0,1 мг/мл исходный раствор,
−1
растворенный в 2 % растворе дигидрата цитрата натрия),

инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре.

Выживаемость около 1000 клеток в одной биологической копии

оценивали с использованием камеры Горяева (×400) под световым

микроскопом. Живые клетки были бесцветными, а мертвые —

синими. Для определения способности к колониеобразованию

использовали чашечный метод Коха. По числу колоний, выросших

после посева на плотную питательную среду определенного объема

исследуемой суспензии, можно судить об исходном содержании в ней

жизнеспособных клеток. Результаты количественного учета

микроорганизмов выражали в условных единицах или так называемых

колониеобразующих единицах (КОЕ).

Ранее нами было показано наличие выраженной фазы гибели

для культуры Е. magnusii при культивировании на питательной среде,

содержащей 1 % глюкозу, тогда как при культивировании на

глицеринсодержащей (1 %) питательной среде данная фаза

отсутствовала (в рамках периода времени проводимого эксперимента)

[5, c. 6]. Исследование выживаемости дрожжевых культур с

использованием метода окрашивания клеток метиленовым синим

свидетельствует, что клетки, выращенные на 1 % глицерине,

демонстрировали более высокую выживаемость на протяжении всего

эксперимента (рис. 1, А). Так, при культивировании на 1 % глицерине
выживаемость составляла 100 % на первых двух этапах

культивирования и снижалась на 14 % к 168 часам культивирования.
26